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紅榮微再 HS Probe qPCR預(yù)混試劑
產(chǎn)品名稱:紅榮微再 HS Probe qPCR預(yù)混試劑產(chǎn)品貨號:RF-Q3001英文名稱:HS Probe qPCR Mix產(chǎn)品規(guī)格:1 mL, 20 μl × 100 rnxs
產(chǎn)品簡介:
HS Probe qPCR預(yù)混試劑是一款適用于探針法的Real time PCR(qPCR)反應(yīng)的通用試劑。包含了除模板,引物,探針外所有的組分。優(yōu)選的熱啟動Taq DNA polymerase,配合針對低拷貝模板而優(yōu)化的緩沖液,可以有效抑制非特異性擴增,大大增加qPCR擴增效率以及檢測靈敏度,適用于進行高靈敏度的qPCR反應(yīng)。參比染料rox隨試劑盒提供。
本產(chǎn)品使用前只需要加入引物、模板、探針、ROX(根據(jù)使用的機型而定)、水;利用本產(chǎn)品可在廣泛的定量區(qū)域內(nèi)得到良好的標準曲線,對靶基因進行準確的定量、定性和SNP檢測,具有重復(fù)性好、可信度高、并兼容各種不同類型的qPCR探針的特點。
產(chǎn)品名稱:紅榮微再 HS Probe qPCR預(yù)混試劑
產(chǎn)品貨號:RF-Q3001
產(chǎn)品應(yīng)用:
基因表達分析
• 地拷貝基因檢測
• SNP和等位基因分型
• 測序和微陣列結(jié)果的驗證
儲存與運輸:
1. 冰上運輸
2. 到貨后-20℃恒溫冷凍冰箱避光保存。
常用Q&A:
Q: 擴增曲線異常
1、擴增曲線不光滑:
系統(tǒng)需要校正,提高模板濃度;
ROX 使用錯誤,更換正確的ROX 類型。
2、擴增曲線斷裂或下滑:
模板濃度高,提高閾值并重新分析數(shù)據(jù);
降低模板濃度。
3、個別擴增曲線驟降:
反應(yīng)管有氣泡。處理樣本時注意離心。
Q:反應(yīng)結(jié)束無擴增曲線
1、循環(huán)數(shù)不夠:一般設(shè)40 個循環(huán),但要注意過多循環(huán)數(shù)增加背景信號,降低數(shù)據(jù)可信度。
2、確認程序中是否設(shè)置信號采集:兩步法的擴增程序一般在退火/延伸階段采集信號;三步法擴增信
號采集設(shè)置在延伸階段。
3、引物降解:PAGE 檢測排除其降解的可能性。
4、模板濃度太低:減少稀釋度重復(fù)實驗,先從高濃度做起。
5、模板降解:重新制備模板。
Q: Ct 值太高
1、擴增效率低:優(yōu)化反應(yīng)條件,嘗試三步法擴增,或重新設(shè)計合成引物。
2、模板濃度低:減少稀釋度,先從高濃度做起。
3、模板降解:重新制備模板。
4、PCR 產(chǎn)物太長:推薦 PCR 產(chǎn)物長度 80-150 bp。
5、存在 PCR 抑制劑:若為模板帶入,加大模板稀釋倍數(shù)或重新制備模板。
Q:陰性對照出現(xiàn)明顯擴增
1、反應(yīng)體系污染:更換新的Mix、水、引物等重復(fù)實驗;反應(yīng)體系在超凈工作臺內(nèi)配制,減少氣溶膠污染。
2、引物設(shè)計不合理:重新設(shè)計并合成引物。
產(chǎn)品名稱:紅榮微再 HS Probe qPCR預(yù)混試劑
產(chǎn)品貨號:RF-Q3001
關(guān)于公司:
紅榮微再作為RNA、NGS、ctDNA、qPCR的分子診斷專業(yè)供應(yīng)商,以“傳遞科學(xué)價值,服務(wù)科學(xué)研究"為宗旨,努力為客戶提供質(zhì)量可靠、貨美價優(yōu)的分子診斷試劑耗材,與客戶攜手為中國分子診斷的發(fā)展而前行。
紅榮微再——助力分子診斷新未來
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