產品英文名：BD RhapsodyTM Single-Cell Analysis System
產品中文名：BD RhapsodyTM 單細胞分析系統(tǒng)
應用：單細胞的RNA-seq測序，基因表達分析。Onco-BC 靶向檢測，免疫反應檢測，T-細胞靶向檢測。
優(yōu)勢：同時分析數(shù)千個細胞，每個細胞提取獨立數(shù)據(jù)，體現(xiàn)異質性。
品牌產地：美國BD
BD RhapsodyTM 單細胞分析系統(tǒng)及更多BD產品由華雅再生醫(yī)學旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司 代理。紅榮微再以“傳遞科學價值，服務科學研究”為宗旨，主營干細胞、精準醫(yī)療、細胞治療、器官再生四大板塊的產品。
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BD RhapsodyTM 單細胞分析系統(tǒng)
數(shù)千個單細胞數(shù)百個基因的平行分析
單細胞 RNAseq 正在改變我們對細胞的理解。BDRhapsody™單細胞分析系統(tǒng)基于 BD 在細胞生物學領域 40年的專業(yè)技術，滿足您的實驗需求，在單細胞水平理解細胞形態(tài)和功能。
這種全新的分析系統(tǒng)克服了傳統(tǒng)檢測的局限性，例如微陣列和大量細胞 RNAseq，這些檢測通過實現(xiàn)對各個細胞之間的微妙差異的觀察，依賴于對多個細胞的平均檢測。用戶可以鑒定和表征新型和罕見細胞類型，其進一步幫助理解從免疫學到腫瘤學等多個領域內的生物學過程。
BD Rhapsody 單細胞分析系統(tǒng)能夠對成千上萬個單細胞的數(shù)百個表達基因進行數(shù)字定量，提供足夠靈活的定制測定法以滿足任何實驗需要，其有效系統(tǒng)可縮短實驗時間和降低測序成本。
系統(tǒng)組件包括：
□ BD Rhapsody 掃描儀
□ BD Rhapsody 上樣臺
□ BD Rhapsody 卡式芯片
□ 分子標簽試劑和文庫制備
□ 特定應用的靶向檢測試劑盒（panel）
BD Rhapsody 單細胞分析系統(tǒng)工作原理
下圖顯示了該系統(tǒng)如何實現(xiàn)對數(shù)百個基因的基因表達水平進行數(shù)字化定量。其采用新的平面陣列微孔用于細胞捕獲并進行基于微球的 3'RNAseq 測定。
開始 - 細胞捕獲和分離步驟
BD Rhapsody 卡式芯片可以在磁性的寡核苷酸條形碼標記微球上實現(xiàn)單細胞捕獲和 mRNA 轉錄子的分子標簽。然后將這些微球合并到單個管中用于 cDNA 擴增和文庫構建。
1.在微孔中，一個細胞與一個條碼標記微球匹配
2.裂解細胞將 mRNA與微球上條碼標記的捕獲寡核苷酸雜交
3. 微球回收
4. cDNA 合成
5. 測序和構建單細胞基因表達譜
克服 PCR 偏差 – BD 分子標簽
當對序列讀取進行計數(shù)時，PCR 擴增偏差可導致基因定量不準確。BD 的分子標簽技術為單個細胞的單個基因分配了*的分子索引，也稱為“分子條形碼”。實驗者可借此克服擴增偏差，更準確地計算轉錄水平。
為您的實驗定制工作流程
對于不同用戶和實驗，單細胞實驗工作流程往往需要不同程度的樣本操作、質量和通量。BD 儀器選項可以根據(jù)具體需求進行配置。BD FACS 分選機（如 BD FACSMelody™）是 BD Rhapsody 系統(tǒng)上游樣本富集的良好選擇。BD Rhapsody掃描儀提供自動化細胞計數(shù)和細胞樣本活性測試，幫助用戶制備適用于卡式芯片單細胞捕獲的*濃度的樣本。掃描儀提供了卡式芯片上微球捕獲細胞的計數(shù)。BD Rhapsody 上樣臺輕巧便攜，可在實驗室內輕松移動。同樣還提供生物信息學途徑和可視化工具。這些工具包括 UMI 分析算法和可視化工具，即使沒有經驗的用戶也可分析和理解單細胞數(shù)據(jù)。
圖. 實例：BD Rhapsody 工作流程，包括細胞分離（FACS 可選），細胞捕獲和分子標簽、測序和數(shù)據(jù)分析。
1. 樣本
2. 通過 BD Rhapsody 進行單細胞
3. 在 Illumina 平臺上進行測序
4. BD 基因組數(shù)據(jù)分析
更有效的測序可以更低的成本實現(xiàn)更高的通量
由于與高通量實驗方法相關的測序成本，單細胞實驗往往非常昂貴。BD Rhapsody 單細胞分析系統(tǒng)設計有多個功能，可以更有效地利用測序來降低實驗成本。
靶向測定 - 由于檢測靈敏度的提高，特定的基因組合方法可使用少量的時間和成本，幫助產生類似于全轉錄組分析（Whole Transcriptome Analysis，WTA）測定的結果。這種方法還提高了 UMI 計數(shù)效率，從而極大程度的節(jié)省了實驗時間和成本。
儲存 - 從樣本中得到的完整 cDNA 可在磁性微球上穩(wěn)定存儲，允許將珍貴樣本保存長達 16 周。這可使用戶在時間允許的情況下靈活地對樣本進行測序，并通過對儲存的微球池進行等分或分樣來實現(xiàn)同一樣本的多個測定。
分樣—在磁性微球上儲存的 cDNA A 可以分成一個或多個等分試樣，并使用定制或預先設計的組合（panel）進行擴增。通過提供對部分樣本進行測序的選項和對樣本不同組合（panel）進行測試的靈活性，分樣可降低成本。
評估 BD Rhapsody 的性能
為了確定 BD Rhapsody 單細胞分析系統(tǒng)的技術性能，將人 293T 和小鼠 NIH / 3T3 細胞的 1：1 混合物以不同濃度上樣到 BD Rhapsody 卡式芯片上。儲存的 cDNA 分子普遍擴增并進行低通量測序（每個細胞約8,700 個讀數(shù)）。在測序數(shù)據(jù)中檢測到 1,109 個細胞的上樣條件下，每個細胞中，來自每個細胞的平均 99.4％的分子經檢測僅為人或小鼠，這表明微孔之間的串擾非常小。在測序數(shù)據(jù)中檢測到 1，000 個或更少細胞的上樣密度下，多重態(tài)發(fā)生率接近零，并且在 15，000 個細胞下小于 5％。
圖：使用 BD Rhapsody 的微孔之間的zui小串擾和低多重態(tài)率
使單細胞測序效率更高
靶向方法對單細胞分析的益處通過使用競爭產品的WTA 測定和 BD Rhapsody 免疫反應組合（panel）（人）在相似的測序深度下對外周血單核細胞（PBMC）進行表達譜分析來證明。雖然兩種測定方法的 t-SNE 表達譜分析都顯示了已知 PMBC 細胞類型的聚類結果，靶向組合（panel）顯示了比 WTA 更高的靈敏度（讀數(shù)/細胞）和 UMI 計數(shù)效率。BD Rhapsody 測定實現(xiàn)了與競品 WTA 測定類似的聚類性能，而測序讀數(shù)降低了近 10 倍（靶向讀數(shù) 2k vs. WTA 讀數(shù) 20k）。與使用 WTA 方法不同，靶向組合（panel）避免了對多個高表達基因的測序如核糖體蛋白或低表達變異性，從而提高測定效率。
混合微球的測試儲存（參見下圖），從含有稀少轉移性乳腺癌細胞的淋巴結所得的 1，000 個細胞的兩個分樣使用BD Rhapsody Onco-BC 靶向組合（panel）進行分析。在 4℃下保存微球，在 0、6 和 12 周對樣本進行測定。在分樣之間基因表達具有很強的相關性，表明儲存 cDNA 具有極小的批次效應和較高的穩(wěn)定性。
主要應用的靶向基因檢測試劑盒（panel）
靶向方法有助于提高單細胞測序效率，并推動對當今一些挑戰(zhàn)性的科學領域的進一步探索。我們經驗證的檢測試劑盒（panel）顯示穩(wěn)定且可重現(xiàn)的細胞異質性陣列，可用于探索與眾多應用相關的細胞類型。BD Rhapsody 系統(tǒng)包括以下檢測試劑盒（panel）：
● BD Rhapsody Onco-BC 靶向檢測試劑盒（panel） – 與乳腺癌和免疫細胞相關的 400 個基因
● BD Rhapsody 免疫反應檢測試劑盒（panel） – 免疫細胞類型譜分析
● BD Rhapsody T-細胞靶向檢測試劑盒（panel）
● BD Rhapsody 補充檢測試劑盒（panel）
● BD Rhapsody 自定義檢測試劑盒（panel）
高級軟件和可視化功能增加您結果的靈活性
BD Rhapsody 系統(tǒng)還提供生物信息學途徑和可視化工具。這些工具包括 UMI 分析算法和可視化工具，即使沒有經驗的用戶也能夠分析和理解單細胞數(shù)據(jù)。
1. 序列發(fā)生器輸出.fastq 文件
- 多路分用 讀數(shù)；調準讀數(shù)
- 計算每個細胞每個基因的*分子標識符（UMI）
- 執(zhí)行 UMI 調整算法
- 進行細胞標記篩選
- 單細胞表達譜
BD Rhapsody 系統(tǒng)數(shù)據(jù)集可從 www.xxxxx。。ｃｏｍ 下載
實例數(shù)據(jù)集：
◎ 來自健康捐贈者的 PMBC 的單細胞譜分析
◎ T 細胞表型分析
◎ 乳腺癌腫瘤活檢的單細胞譜分析
單細胞研究的完整端到端系統(tǒng)
BD Rhapsody 單細胞分析系統(tǒng)通過完整的工具系統(tǒng)（包括試劑和分析軟件）來加強和簡化您的研究，這些工具可以協(xié)同工作，以滿足您*的單細胞實驗需求。我們將使您直接通過樣本獲取結果，同時使用實驗成本和復雜性顯著降低的測定方法節(jié)省時間和成本，改善數(shù)據(jù)和提高測序效率。40 年來，BD 一直是單細胞生物學領域值得信賴的合作伙伴。您可以依靠我們來幫助您拓展單細胞分析的新領域。
BD RhapsodyTM 單細胞分析系統(tǒng)及更多BD產品由華雅再生醫(yī)學旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司 代理。紅榮微再以“傳遞科學價值，服務科學研究”為宗旨，主營干細胞、精準醫(yī)療、細胞治療、器官再生四大板塊的產品。
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