造血干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基使用說(shuō)明
更新時(shí)間：2016-04-25 點(diǎn)擊次數(shù)：1650次
造血干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基方法概述：
分離混合血液白細(xì)胞早期的方法，總是伴隨紅細(xì)胞聚集，只輕微影響白細(xì)胞。通過(guò)離心，紅細(xì)胞密度增加聚集，同時(shí)可以從離心管上部收集白細(xì)胞。
Byum提出了一種更方便，通過(guò)使用Ficoll 甲泛影鈉溶液離心快速分離方法。稀釋的血液在Ficoll甲泛影鈉溶液中分層，低速短時(shí)離心。紅細(xì)胞和沉降到管底的粒細(xì)胞，和單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞）和血小板可以從兩個(gè)分層之間收集。
許多研究者不斷努力，修訂了Byum方法，MP生物醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的LSM，方法的*之處是運(yùn)用,泛影鈉成功的代替了甲泛影鈉。
造血干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基使用說(shuō)明：
以下的操作步驟是zui初由Byum.設(shè)計(jì)的程序的眾多改良版本中的一種。此程序的改良是通過(guò)運(yùn)用除去血液中的纖維蛋白或抗凝血?jiǎng)┨幚砣梭w血液；這種改良對(duì)于其他物種來(lái)源血液或者其他組織非常有必要。
1.輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合
2.無(wú)菌轉(zhuǎn)移3 mlLSM到15 ml離心管中。
3.混合2 ml除纖維蛋白血液或肝素處理血液和2 ml 生理鹽水
4.仔細(xì)的將稀釋血液加入3 mlLSM（室溫）于15ml離心管中，在血液和LSM中形成一個(gè)明顯的分層。人造血干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基不要將稀釋血液混合入LSM中。
5.室溫下400g離心15-30分鐘，離心可以沉淀紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞同時(shí)可以再LSM上形成一層單核淋巴細(xì)胞，如上圖所示。
6.吸出淋巴細(xì)胞上方2-3mm的血漿。
7.吸取淋巴細(xì)胞層以及它下面一半的LSM和轉(zhuǎn)移到另外的一個(gè)離心管。加入等體積的平衡鹽緩沖液至淋巴細(xì)胞離心管中，室溫離心10分鐘，離心速度設(shè)定在既不損傷細(xì)胞又能沉淀細(xì)胞即刻，例如160 - 260 x g（去除LSM和降低血小板的百分比）。
8. 用平衡鹽緩沖液清洗細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基重懸細(xì)胞。
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