心肌分化試劑盒的復蘇方法:
1. 37℃水浴預熱心肌接種培養(yǎng)基,取出包被過Matrix的培養(yǎng)皿/瓶,吸去包被液并加入適量心肌接種培養(yǎng)基,置于5% CO2的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中。
2. 37℃解凍細胞,快速搖晃使細胞融化至僅剩一小塊冰晶(避免凍存管蓋接觸水面),迅速取出并用70%酒精消毒凍存管外表面。
3. 用1ml移液器小心的將細胞懸液轉(zhuǎn)移至一個新的50ml離心管,避免劇烈吹吸。
4. 用1ml 心肌接種培養(yǎng)基潤洗凍存管,以收集剩余細胞。然后逐滴加入含有細胞懸液的50ml離心管,由于zui初滴加的稀釋比例較大,應維持在5秒1滴(50uL)的較慢速率,2分鐘左右滴加完此1ml培養(yǎng)基,滴加過程中不斷輕搖混勻。
5. 以每秒1滴的速率,逐滴加入4ml 心肌接種培養(yǎng)基,滴加過程中不斷輕搖混勻。200g離心5分鐘。
6. 用心肌接種培養(yǎng)基重懸細胞,輕柔吹打混勻,并接種到準備好的培養(yǎng)皿/瓶中,水平十字振動使細胞均勻分布。
7. 5% CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時,更換為心肌維持培養(yǎng)基,維持培養(yǎng)。
心肌分化試劑盒的維持:
1. 37℃水浴預熱心肌維持培養(yǎng)基。
2. 獲得的心肌細胞用心肌維持培養(yǎng)基培養(yǎng),每48小時換液一次;或者加入標準量150%的維持培養(yǎng)基,每72小時換液一次。
3. 細胞在4周內(nèi)性狀穩(wěn)定。如果需要長期培養(yǎng),為了維持細胞穩(wěn)定性和純度,需要定期采用心肌純化*培養(yǎng)基進行處理,一般每4-6周處理一次,每次持續(xù)3-4天。